ALLERgen spezifisches IgG / IgG4
Enzymimmunoassay zur quantitativen Bestimmung von Allergen-spezifischem Immunglobulin G/G4 (IgG/ IgG4) in humanem Serum oder Plasma
Die quantitative Messung der allergenspezifischen IgG(4)-Konzentration hat eine große Bedeutung für die Diagnostik der Lebensmittelunverträglichkeit, für die Auswahl einer angemessenen Therapie und für Differentialdiagnostik einiger Arten von Allergien. In Kombination mit anderen Methoden kann die Wirksamkeit der allergenspezifischen Immuntherapie kontrolliert werden.
Die ALLERgen-Kits basieren auf dem µ-capture Enzymimmunassay, wobei dieselben Festphasen-Mikrowells, die mit humanen anti-IgG(4)-Antikörpern beschichtet sind, für die Analyse der verschiedenen Allergene und zur Erstellung der Eichkurve verwendet werden.
Im ALLERgenA-spez. IgG-Kit(4) zum Nachweis von IgG(4)-Antikörpern, die für bestimmte Allergene spezifisch sind, werden zwei Arten von enzymgebundenem Immunsorbentassay verwendet. Sandwich-Typ-Analyse wird in Mikrowells für Standards verwendet. Die indirekte Festphasen-Enzym-Immundetektion wird in Mikrowells eingesetzt, die für Proben von Blutserum verwendet werden. Die Oberfläche der Mikrowells ist mit Streptavidin beschichtet. Im Kit werden zwei monoklonale Antikörper verwendet, die spezifisch für verschiedene Epitope von Immunglobulinen IgG(4) sind. Einer dieser Antikörper ist konjugiert mit Biotinester; der andere ist mit Meerrettichperoxidase (HRP) konjugiert.
Die Bindung von in Standards enthaltenen IgG(4)-Molekülen mit Anti-IgG(4)-Biotin-Konjugat und die gleichzeitige Immobilisierung in der Festphase durch Streptavidinmoleküle erfolgen während der ersten Inkubation. Im gleichen Stadium findet die Bindung von biotinylierten Allergenen mit IgG(4)-Molekülen in den mit Probenserum gefüllten Mikrowells, die für diese Allergene spezifisch sind, statt und immobilisiert diese in der festen Phase durch Streptavidin. Der Überschuss an Anti-IgG(4)-Biotin wird aus den Mikrowells der Standards entfernt und der Überschuss an biotinylierten Allergenen wird durch Waschen aus den Mikrowells der Proben entfernt. Während der zweiten Inkubation bindet Anti-IgG(4)-Peroxidase-Konjugat (MAB2) an IgG(4)-Moleküle in den Mikrowells der Standards mit den Kalibratoren und an IgG(4)-Moleküle der getesteten Proben in den Mikrowells. Durch Dekantieren und Waschen der Mikrowells wird überschüssiges Anti-IgG(4)-Peroxidase-Konjugat entfernt. Während der Inkubation mit TMB ändert sich der Farbgrad. Der Farbgrad steht im Verhältnis zur Menge des gebundenen Anti-IgG(4)-Peroxidase-Konjugats. Basierend auf Kalibrationskurven mit optischem Dichtewert, gemessen bei 450 nm und 405 nm, wird die Konzentration spezifischer IgG(4) in den geprüften Proben nach der optischen Dichtemessung der Lösung in den Mikrowells definiert.
Inhalt und Komponenten:
Spezifisches IgG(4) Basic-Kit in 3 Größen für 96/480/960 Tests
IgG(4)-Mikrotiterplatte:
Beschichtet mit Anti-IgG(4). Ein Set für 96 Tests enthält eine Mikrotiterplatte mit 12 Streifen x 8 Wells. Jedes Well ist mit monoklonalen humanen anti-IgG(4)-Antikörpern beschichtet. Lagern Sie die unbenutzten Streifen bei 2 – 8 °C in dem verschließbaren Plastikbeutel zusammen mit dem Trockenmittel.
Konjugat E1:
Jedes Fläschchen enthält 5 ml monoklonale Anti-IgG(4)-Antikörper-Lösung, konjugiert mit Biotin in rot gefärbten Puffer, pH 5,5, mit 0,001% Proclin 300. Gebrauchsfertig.
Konjugat E2:
Jedes Fläschchen enthält 22 ml monoklonale Anti-IgG(4)-Antikörper, konjugiert mit HRP in rot gefärbten Puffer, pH 5,5, mit 0,001% Proclin 300. Gebrauchsfertig.
spezifisches IgG(4)-Inkubationspuffer:
Jedes Fläschchen enthält 16 ml TRIS-Puffer, pH 8,4, mit 0.005% Proclin 300. Gebrauchsfertig.
Substrat:
Jedes Fläschchen enthält 14 ml einer stabilisierten und gebrauchsfertigen Mischung aus 3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidin (TMB) und Wasserstoffperoxid (H2O2). Gebrauchsfertig.
Stopplösung:
Jedes Fläschchen enthält 50 ml 0,3 M Schwefelsäure. Gebrauchsfertig.
Waschpuffer-Konzentrat 10x:
Jedes Fläschchen enthält 100 ml einer 10fach konzentrierten Waschlösung. Zum Ansetzen der Gebrauchslösung den Inhalt des Fläschchens mit 900 ml destilliertem Wasser mischen.
Kalibrations-Kit
Kalibratoren für spezifische IgG(4):
Jedes Fläschchen mit Kalibratorlösung enthält 0,5 ml Human-IgG(4) in Pferdeserum mit 0,01-prozentigem Proclin 300.
Oben angegebene IgG(4)-Konzentrationen sind gegen den internationalen Standard der WHO Immunglobulin G, A und M, Human Serum, NIBSC-Code: 67/086 kalibriert. Bei Temperaturen zwischen 2 – 8 °C aufbewahren. Gebrauchsfertig.
spezifisches IgG(4)-Kontrollserum:
Jedes Fläschchen enthält 0,5 ml Human- IgG(4) in Pferdeserum und 0,01-prozentigem Proclin 300. Den erlaubten Bereich für das spezifische IgG(4)-Kontrollserum finden Sie im Kit beiliegenden Analysezertifikat. Gebrauchsfertig.